Produk

Cara ngagabungkeun pangaruh mutasi simultan pikeun ngarobah aktivitas énzimatik henteu gampang diprediksi sabab épék ieu henteu salawasna aditif dina cara linier.Lantaran kitu, karakterisasi épék mutasi simultan résidu asam amino anu ngabeungkeut substrat tiasa masihan kontribusi anu signifikan pikeun pamahaman spésifisitas substrat énzim.Dina béta-glikosidase ti Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), duanana résidu Q39 sareng E451 berinteraksi sareng substrat sareng ieu penting pisan pikeun nangtukeun spésifisitas substrat.Mutant ganda tina Sfbetagly (A451E39, S451E39 jeung S451N39) disiapkeun ku mutagenesis situs-diarahkeun, dinyatakeun dina baktéri sarta dimurnikeun maké kromatografi pangirut.Enzim-enzim ini dicirikan menggunakan p-nitrofenil beta-galaktosida dan p-nitrofenil beta-fukosida sebagai substrat.Rasio k ucing / Km pikeun mutan tunggal sareng ganda tina Sfbetagly anu ngandung mutasi diarahkeun situs dina posisi Q39 sareng E451 dianggo pikeun nunjukkeun yén pangaruh énergi bébas ESdouble keris (kompleks kaayaan transisi énzim) tina mutasi ganda (Gdouble). daggerxy) sanes jumlah éfék anu dihasilkeun tina mutasi tunggal (Gdouble daggerx sareng Gdouble daggery).Bédana dina keris Gdouble ieu nunjukkeun yén efek tina mutasi tunggal sawaréh tumpang tindih.Lantaran kitu, pangaruh umum ieu diitung ngan sakali dina Gdouble daggerxy.Data kristalografi dina béta-glikosidase nembongkeun ayana beungkeut hidrogén bidentat ngalibetkeun résidu Q39 jeung E451 jeung gugus hidroksil substrat nu sarua.Ku alatan éta, duanana data termodinamika jeung kristalografi nunjukkeun yén résidu Q39 jeung E451 exert pangaruh silih on interaksi maranéhanana jeung substrat.