Produk

Uji kromatografi cair kinerja tinggi anyar pikeun glikosiltransferase dumasar kana derivatisasi sareng asam anthranilic sareng deteksi fluoresensi.

Assays dikembangkeun ngagunakeun kimia panyiri unik asam 2-aminobenzoic (2AA; asam anthranilic, AA) pikeun kagiatan ngukur duanana β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) jeung α2-6 sialyltransferase (ST-6) ku-kinerja tinggi cair. kromatografi (HPLC) kalawan deteksi fluoresensi (Anumula KR. 2006. Kamajuan dina métode derivatization fluoresensi pikeun-kinerja tinggi analisis kromatografi cair karbohidrat glikoprotein. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) jeung N-asetillactosamine dipaké salaku akséptor jeung uridin difosfat (UDP)-galaktosa jeung cytidine monofosfat (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) salaku donor pikeun GalT-1 jeung ST-6, masing-masing.Produk énzimatik dilabélan in situ sareng AA sareng dipisahkeun tina substrat dina kolom TSKgel Amide 80 nganggo kaayaan fase normal.Unit énzim ditangtukeun ti wewengkon puncak ku ngabandingkeun jeung standar turunan concomitantly Gal-β1-4GlcNAc jeung NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Linearity (waktos jeung konsentrasi énzim), precision (intra- sarta interassay) sarta reproducibility pikeun assays diadegkeun.The assays kapanggih mangpaat dina ngawas kagiatan énzim salila isolasi jeung purifikasi.Tesna sénsitip pisan sareng dilaksanakeun sami sareng atanapi langkung saé tibatan pangukuran dumasar-gula radioaktif tradisional.Format assay ogé tiasa dianggo pikeun ngukur kagiatan transferase sanés, upami akséptor karbohidrat ngandung tungtung pangurangan pikeun panyiri.Uji pikeun akséptor glikoprotein dikembangkeun nganggo IgG.Metodeu profiling HPLC pondok dikembangkeun pikeun misahkeun glycans IgG (bintennary G0, G1, G2, mono- jeung disiaylated), nu facilitated tekad kagiatan GalT-1 jeung ST-6 dina cara gancang.Saterusna, métode profiling ieu kudu ngabuktikeun mangpaat pikeun ngawas parobahan IgG glycans dina setélan klinis.