Produk

Fosforilasi protéin ngatur rupa-rupa fungsi sélular sarta maénkeun peran konci dina ngembangkeun awal tutuwuhan.Pikeun ngalengkepan sareng ngalegaan panilitian saméméhna ngeunaan fosforilasi protéin dina bibit Arabidopsis kami nganggo pendekatan alternatif anu ngagabungkeun ékstraksi protéin dina kaayaan non-denaturing sareng pengayaan kromatografi afinitas logam-ion (IMAC) tina fosfoprotein utuh dina ekstrak Rubisco-depleted, dituturkeun ku idéntifikasi. ngagunakeun éléktroforésis gél dua diménsi (2-DE) jeung kromatografi cair-tandem spéktrometri massa (LC-MS/MS).Pencernaan trypsin in-gél sareng analisa bintik-bintik gél anu dipilih ngaidentipikasi 144 péptida sareng résidu fosforilasi, anu ngan ukur 18 fosfopéptida sareng 8 fosfosit anu kapanggih dina basis data situs fosforilasi PhosPhAt 4.0 sareng P3DB Arabidopsis thaliana.Langkung ti satengah tina 82 fosfoprotein anu diidentifikasi kalibet dina métabolisme karbohidrat, fotosintésis / réspirasi atanapi sms mékanisme réspon stres oksidatif.Pengayaan fosfoprotein utuh sateuacan 2-DE sareng LC-MS / MS katingalina ningkatkeun deteksi threonine sareng résidu tirosin fosforilasi dibandingkeun sareng metode anu ngagunakeun pengayaan tingkat péptida, nunjukkeun yén dua pendekatan éta rada pelengkap dina hal cakupan situs fosforilasi.Ngabandingkeun hasil pikeun bibit ngora sareng anu dicandak sateuacanna pikeun daun Arabidopsis dewasa ngaidentifikasi lima protéin anu difosforilasi sacara diferensial dina jaringan ieu, nunjukkeun poténsi téknik ieu pikeun nalungtik dinamika fosforilasi protéin nalika kamekaran pepelakan.