Produk

Pikeun sacara khusus ngitung sababaraha métabolit 5-fluorouracil (5-FU) sareng dua nukléotida monofosfat endogen, kami ngembangkeun metode asli dumasar kana spéktrometri massa kromatografi-tandem cair (LC-MS/MS).Assay ieu ngamungkinkeun pikeun nangtukeun: (i) produksi intrasélular 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) tina 5-FU atanapi 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) dampak konsentrasi 5-FdUMP dina rasio intrasélular 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP), jeung (iii) sékrési sékrési 5-FdUMP jeung 5-FU tina sél budaya manusa ku transporters ABC.Dina kaayaan ékspérimén kami, sél diinkubasi ku 5-FU atanapi 5-FUrd.Lajeng, protéin sélular diendapkeun ku métanol.Prosedur ieu nyadiakeun recovery ékstraksi tinggi.Salaku tambahan, pikeun ngukur sékrési 5-FU sareng 5-FdUMP tina sél, kami ngalaksanakeun kuantifikasi molekul ieu dina medium kultur.Média boh langsung nyuntik (5-FU) atanapi di handapeun ékstraksi fase padet ngagunakeun cartridge ékstraksi Oasis Lilin (5-FdUMP).Separation of analytes ieu dipigawé dina dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) kolom kalawan mode isocratic maké amonium formate panyangga / métanol / cai (5/5/90, v / v) salaku fase mobile.waktos ngajalankeun teu ngaleuwihan 6.2 mnt.Analit diionisasi dina panganteur electrospray dina mode ion négatip.Urang divalidasi métode ngaliwatan rentang 2.5-150 ng mL -1 nurutkeun sanyawa.Variabilitas intra- sareng antar-assay langkung handap tina 10% salami tujuh dinten.Sadaya sanyawa stabil dina sél atanapi dina medium kultur nalika sampel disimpen dina suhu -20 °C sahenteuna sahenteuna dua minggu, sareng saatos tilu siklus freeze-thaw.Henteu aya pangaruh matriks anu dititénan dina duanana média.