Produk

Analisis kajadian fosforilasi proteome-lega masih mangrupa tantangan analitik utama alatan pajeulitna pisan jaringan fosforilasi protéin.Dina karya ieu, urang ngevaluasi komplementaritas Lys-N, Lys-C, sareng trypsin ngeunaan kamampuanna pikeun nyumbang kana analisa global fosfoproteom.Versi anu disampurnakeun tina bursa kation kuat pH-rendah digunakeun pikeun sacara éfisién misahkeun péptida-terminal asetilasi, fosforilasi, sareng nonmodified N-terminal.Jumlahna aya 5036 fosfopéptida nonredundant bisa dicirikeun ku laju kapanggihna palsu <1% tina 1 mg protéin ngagunakeun kombinasi tilu énzim.Data kami ngungkabkeun yén tumpang tindihna antara sét data fosfopéptida anu dihasilkeun ku protease anu béda-béda éta marginal, sedengkeun tumpang tindihna antara dua set data tryptic anu sami dibangkitkeun kapanggih sahenteuna 4 kali langkung luhur.Ku cara kieu, pamakean paralel Lys-N sareng trypsin ngamungkinkeun paningkatan 72% dina jumlah fosfopéptida anu dideteksi dibandingkeun d sareng tripsin nyalira, sedengkeun percobaan réplikasi tripsin ngan ukur nyababkeun paningkatan 25%.Ku kituna, nalika museurkeun solely on trypsin jeung Lys-N data, urang ngaidentipikasi 4671 nonredundant phosphopeptides.Analisis salajengna tina situs anu dideteksi nunjukkeun yén set data Lys-N sareng trypsin diperkaya dina motif fosforilasi anu béda-béda, salajengna ngabuktikeun yén pendekatan multiprotease pohara berharga dina analisis fosfoproteome.